Descripción
FICHA TÉCNICA
PRUEBA
Diagnóstico diferencial de la Infección Respiratoria Aguda con SARS-CoV-2 (COVID-19), prueba PCR en Zaragoza
TÉCNICA
El Diagnóstico diferencial de la Infección Respiratoria Aguda con SARS-CoV-2 (COVID-19), prueba PCR, se realiza mediante una PCR múltiple e hibridación reversa.
DESCRIPCIÓN DE LA PRUEBA
El resultado del Diagnóstico diferencial de la Infección Respiratoria Aguda con SARS-CoV-2 (COVID-19), prueba PCR, se entregará, telemáticamente, en el mismo día de la toma de muestra
Esta prueba permite la identificación de los principales patógenos causantes de infecciones respiratorias agudas. Los organismos responsables de estas infecciones incluyen a virus y bacterias, siendo relativamente frecuentes los casos de co-infecciones.
Esta prueba, mediante la amplificación del ADN/ARN vírico por transcripción inversa y PCR múltiple en un solo paso y posterior hibridación reversa sobre una membrana que contiene sondas específicas, nos va a permitir la detección simultanea de 13 patógenos:
- Influenza virus Tipo A subtipo H3 y subtipo H1N1 (pandémico en 2009)
- Influenza virus Tipo B
- Adenovirus Tipos 1, 2, 3, 4, 6, 7, 8, 11, 12, 16, 18, 21, 31 y 34 (no identificados individualmente)
- Bocavirus
- Coronavirus 229E, HKU-1, NL63, OC43 y
- Coronavirus SARS-CoV-2 (causante de la enfermedad COVID-19) mediante la detección de los genes E (genérico de Sarbecovirus) y gen RdRP (específico de SARS-CoV-2)
- Metapneumovirus
- Parainfluenza virus Tipo 1, Tipo 2, Tipo 3 y Tipo 4
- Virus respiratorio sincitial (tipo A y tipo B)
- Rinovirus
- Enterovirus EV-A, Ev-B y EVD (incluido EV-D68) (no identificados individualmente)
- Bordetella pertusis
- Mycoplasma pneumoniae
CONTROL DE CALIDAD
Para controlar la calidad de los resultados del Diagnóstico diferencial de la Infección Respiratoria Aguda con SARS-CoV-2 (COVID-19), prueba PCR, se utilizan varios controles internos:
- Control de hibridación (5 posiciones de control de hibridación): nos permite comprobar que los reactivos de hibridación y revelado han funcionado correctamente
- 2 Controles de amplificación exógeno (4 posiciones de control de amplificación exógeno): nos permite comprobar que la reacción PCR ha funcionado correctamente
- Control de amplificación endógena (gen de la RNaseP humana): nos permite comprobar que la amplificación ha funcionado correctamente y que la calidad y cantidad del ADN empleado en la amplificación ha sido óptima.
- Control de amplificación endógena (gen de la beta-globina humana): nos permite comprobar que la amplificación ha funcionado correctamente y que la calidad y cantidad del ADN empleado en la amplificación ha sido óptima.
PROTOCOLO
RT-PCR múltiple e Hibridación reversa automatizada:
- Protocolo PCR:
- 1 ciclo a 25ºC de 5 minutos
- 1 ciclo a 50ºC de 20 minutos
- 1 ciclo a 95ºC de 5 minutos
- 45 ciclos: a 95º durante 30 segundos y a 60ºC durante 1 minuto
- Fin a 8ºC
- Protocolo Hibridación Reversa
- Hibridación del producto de PCR biotinilado
- Lávados post-hibridación
- Incubación con enzima Estreptavidina-Fosfatasa
- Revelado con NBT-BCIP
- Análisis automático de resultados
- Validación de resultados
RENDIMIENTO CLÍNICO
ESPECIFICIDAD ANALITICA = 100%
No se ha observado inespecificidad cruzada entre los patógenos estudiados en esta prueba
Tampoco se ha observado inespecificidad con otros virus, bacterias u hongos que puedan estar filogenéticamente relacionados con los patógenos estudiados
- Staphylococcus Aureus
- Haemophilus influenzae
- Serratia marscescens
- tuberculosis
- gonorrhoeae
- trachomatis
- hominis
- pneumoniae
- agalactie
- meningitidis
- genitalium
- burgdorferi
- neoformans
- monocytogenes
- coli
- CMV
- VHS-1
- MUV
- VHS-2
- VEB
- MEV
- Candida albicans
SENSIBILIBILAD ANALÍTICA Y LIMITE DE DETECCION
| ORGANISMO | SENSIBILIDAD ANALÍTICA | Nº COPIAS / REACCIÓN |
| Influenza Tipo A | 100% | 100 |
| Influenza tipo A, subtipo H1N1 | 100% | 10 |
| Influenza Tipo A, subtipo H3 | 100% | 100 |
| Influenza Tipo B | 100% | 500 |
| Metapneumovirus | 100% | 500 |
| Virus Respiratorio Sincitial Tipo A | 100% | 100 |
| Virus Respiratorio Sincitial Tipo B | 100% | 50 |
| Rinovirus | 100% | 100 |
| Enterovirus (*) | 100% | 50 |
| Parainfluenza Tipo 1 | 100% | 100 |
| Parainfluenza Tipo 2 | 100% | 50 |
| Parainfluenza Tipo 3 | 100% | 250 |
| Parainfluenza Tipo 4 | 100% | 250 |
| Adenovirus | 100% | 100 |
| Bocavirus | 100% | 100 |
| Coronavirus 229E | 100% | 250 |
| Coronavirus HKU-1 | 100% | 250 |
| Coronavirus NL63 | 100% | 250 |
| Coronavirus CO43 | 100% | 100 |
| SARS-CoV-2 | 100% | 100 |
| Bordetella pertussis | 100% | 250 |
| Bordetella parapertussis | 100% | 100 |
| Mycoplasma pneumoniae | 100% | 100 |
(*) Datos para Enterovirus EV-A; para alcanzar el 100% de sensibilidad analítica el EV-B precisa 1.000 copias y el EV-D precisa 10 copias
SENSIBILIDAD Y ESPECIFICIDAD DIAGNÓSTICA
| ORGANISMO | SENSIBILIDAD DIAGNOSTICA | ESPECIFICIDAD DIAGNÓSTICA |
| Influenza Tipo A | 95.6 % | 99.7% |
| Influenza tipo A, subtipo H1N1 | 100% | 99.5% |
| Influenza Tipo A, subtipo H3 | 93.2% | 99.4% |
| Influenza Tipo B | 100% | 99.7% |
| Metapneumovirus | 72,0% | 100% |
| Virus Respiratorio Sincitial Tipo A | 70.8% | 100% |
| Virus Respiratorio Sincitial Tipo B | 100% | 99.7% |
| Rinovirus | 80.9% | 98.5% |
| Enterovirus | 100% | 100% |
| Parainfluenza Tipo 1 | NT | 100% |
| Parainfluenza Tipo 2 | NT | 99.7% |
| Parainfluenza Tipo 3 | 88.2% | 100% |
| Parainfluenza Tipo 4 | NT | 100% |
| Adenovirus | 89.7% | 99.2% |
| Bocavirus | 100% | 99.5% |
| Coronavirus 229E | 86.7% | 98.7% |
| Coronavirus HKU-1 | 100% | 100% |
| Coronavirus NL63 | 90.9% | 100% |
| Coronavirus CO43 | 77.8% | 99.2% |
| SARS-CoV-2 | 100% | 100% |
| Bordetella pertussis | NT | 99.5% |
| Bordetella parapertussis | NT | 99.5% |
| Mycoplasma pneumoniae | 96.9% | 99.7% |
NT: no testado debido a un número insuficiente de muestras
TIPO DE MUESTRA
La prueba del Diagnóstico diferencial de la Infección Respiratoria Aguda con SARS-CoV-2 (COVID-19) está validado para las siguiente muestras:
- Exudado nasofaríngeo
- Aspirado nasofaríngeo
- Lavado broncoalveolar
INSTRUCCIONES A SEGUIR ANTES DE LA TOMA DE MUESTRAS
Para garantizar la correcta toma de muestras para el Diagnóstico diferencial de la Infección Respiratoria Aguda con SARS-CoV-2 (COVID-19), prueba PCR, al menos durante los 30 minutos anteriores a la toma de muestra, no se debe comer, beber (ni siquiera agua), fumar, tomar caramelos o mascar chicle
HORARIO DE TOMA DE MUESTRAS
Para garantizar la calidad asistencial y el correcto análisis de los resultados de la prueba de Diagnóstico diferencial de la Infección Respiratoria Aguda con SARS-CoV-2 (COVID-19), prueba PCR, sólo realizaremos 12 muestras/día por estricto orden de toma de muestra
El Horario de toma de muestras para el Diagnóstico diferencial de la Infección Respiratoria Aguda con SARS-CoV-2 (COVID-19) es:
De lunes a viernes de 12:00 h. a 14:00 h. con cita previa
En otro horario es necesaria cita previa en el teléfono 976.218.400 o a través del portal https://gestordecitas.ceydes.com/
PLAZO DE ENTREGA
El resultado del Diagnóstico diferencial de la Infección Respiratoria Aguda con SARS-CoV-2 (COVID-19), prueba PCR, se entregará, telemáticamente, en el mismo día de la toma de muestra.
PRECIO DE LA PRUEBA
El precio de la prueba de Diagnóstico diferencial de la Infección Respiratoria Aguda con SARS-CoV-2 (COVID-19), prueba PCR, es de 180 €
CEyDES
CENTRO DE ESTUDIOS Y DESARROLLOS SANITARIOS, S.A.P.
C/. Miguel de Cervantes 11, Local
50006 Zaragoza
Teléfono 976 218 400
